杏仁核電點燃致癇大鼠血清與下丘腦 Ghrelin 表達(dá)的變化
李 楊1，2， 王 峰1，3， 劉 諍1，3， 楊光明1， 張 震1， 楊 武1， 孫 濤1，3
( 1． 寧夏醫(yī)科大學(xué)顱腦疾病重點實驗室，銀川 750004; 2． 寧夏醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，銀川 750001; 3． 寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院神經(jīng)外科，銀川 750004)

摘要: 目的 觀察杏仁核電點燃大鼠血清與下丘腦中神經(jīng)肽 Ghrelin 表達(dá)的變化趨勢，并探討其原因及意義。
方法 健康雄性 SD 大鼠 64 只，隨機分為空白組( n = 8) 、假手術(shù)組( n = 8) 和點燃組( n = 8) ，點燃組以后一次刺激為零點，再分為 3、6、12、24、48 和 72h 六個亞組，每個亞組 8 只。空白組不予處理; 假手術(shù)組只植入電極不予刺激; 點燃組植入電極后給予電刺激，制作杏仁核點燃致癇膜型。采用 ELISA 法檢測血清中辛酰基化 Ghrelin 的濃度，并應(yīng)用免疫組化和實時熒光定量 PCＲ 技術(shù)分析下丘腦中辛酰基化 Ghrelin 與 Ghrelin mＲ-NA 的表達(dá)情況。結(jié)果 假手術(shù)組與空白組比較，表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義( P ＞ 0． 05) ; 與假手術(shù)組比較，點燃組大鼠血清中辛酰基化 Ghrelin 與下丘腦中辛酰基化 Ghrelin 與 Ghrelin mＲNA 的表達(dá)水平均顯著降低( P ＜ 0． 05) ，并且二者在各時間點的變化趨勢基本一致，即在癲癇發(fā)作后 3h 外周血中辛酰基化Ghrelin 的濃度與下丘腦中辛酰基化 Ghrelin 及 GhrelinmＲNA 表達(dá)均降低，6h 繼續(xù)降低，在 12h 反彈出現(xiàn)一個峰值，而后在24、48、72h 逐步降低。結(jié)論 癲癇發(fā)作后，血清與下丘腦中神經(jīng)肽 Ghrelin 水平均降低且變化趨勢是一致的，通過檢測血清中辛酰基化Ghrelin 水平，可以反映下丘腦中相應(yīng)神經(jīng)肽的變化趨勢，可能成為臨床癲癇診斷和療效評估的一種新型檢測指標(biāo)。
關(guān)鍵詞: 杏仁核; 點燃; 癲癇; 神經(jīng)肽
中圖分類號: Ｒ338． 2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A

Ghrelin 是一種由 28 個氨基酸組成的具有多種生理功能的胃動素相關(guān)的神經(jīng)肽。目前研究證實，它與癲癇發(fā)作有關(guān)。本研究通過杏仁核電點燃法建立大鼠癲癇模型，應(yīng)用 ELISA、免疫組化以及實時熒光定量 PCＲ 技術(shù)，檢測大鼠血清辛酰基化 Ghrelin 和下丘腦中 Ghrelin 的表達(dá)水平，并觀察二者在大鼠癲癇發(fā)作后各個時間點的表達(dá)情況，初步探討其變化的原因及意義。
1 材料與方法
1． 1  ELISA 試劑盒及辛酰化 Ghrelin 抗體( 上海恒遠(yuǎn)生物有限公司) ; 兔超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測試劑盒 PV － 9001 與 DAB 顯色試劑盒ZLI9017( 北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司) ; 實時熒光定量 PCＲ 反應(yīng)試劑盒#K1621 逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)與即用型 2X 預(yù)混母液( 美國 Thermo 公司) ; 引物合成( 上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司) 。1． 2 實驗動物及分組 清潔級 6 ～ 8 周齡雄性Sprague － Dawley 大鼠由寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，體重 250 ～ 280g，單籠飼養(yǎng)。溫度保持在 20 ～ 23℃，濕度 8% ～ 10% ，自由飲食，晝夜節(jié)律。按照隨機數(shù)字表法分為空白組( n = 8) 、假手術(shù)組( n = 8) 、點燃組( n = 48) ，點燃組以后一次刺激結(jié)束開始計算，分為 3、6、12、24、48 和 72h 六
個亞組( n = 8) ［1］。空白組不作處理，假手術(shù)組只植入電極不予刺激; 點燃組植入電極并給予電刺激，制作杏仁核點燃癲癇模型。

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