恒遠(yuǎn)生物|標(biāo)準(zhǔn)曲線的正確繪制方法

分析檢測中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測物質(zhì)的含量，所以標(biāo)曲的制定是實(shí)驗(yàn)室工作中必bi不可少的一環(huán)。那么問題來了，做標(biāo)準(zhǔn)曲線真的那么簡單嗎？您所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線真的做好了嗎?導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲的原因是什么呢？RSD值、線性相關(guān)系數(shù)和線性方程如何？線性好與不好分別是由于哪些原因造成的？是儀器、標(biāo)液，還是配制的問題？接下來恒遠(yuǎn)生物為您揭曉答案！





一、前期測定時注意：




1.儀器校驗(yàn)好。




2.移取液體體積要精確，保證迅速準(zhǔn)確，盡可能用一根移液管；為減小人為所帶來的誤差，同一種液體需由同一個人操作；




3.保證標(biāo)準(zhǔn)品的純度，所用標(biāo)準(zhǔn)品最好是新打開的，純度較高的固體或溶液，防止污染；




4.容器要保證潔凈；




5.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序；




6.如果要測OD值，應(yīng)保證測前各管液體充分混勻；




7.若還是有某個點(diǎn)誤差較大，應(yīng)舍棄。




另外：




1.樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事情，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將無從談起。




2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈s型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。




3.最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。




4.檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。




5.標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(diǎn)，但至少要保證有5個點(diǎn)。




6.做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動，但一般來說，相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999。




二、分光光度法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所遇問題？




1.單色光純度不夠




問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線上端向下彎曲。




措施：光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，光度計的有效譜帶寬度越窄越好，有利于獲得純度高的單色光。




2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一致




如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍瑒t曲線的延線與縱坐標(biāo)相交；反之，與橫坐標(biāo)相交。




3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問題




當(dāng)顯色反應(yīng)的靈敏度不高時，被測物低于某一濃度就不能顯色，當(dāng)濃度不同時，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時部分膠體顆粒的聚沉，致使測定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。




4.操作上的原因




問題：褪色反應(yīng)，顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色，若比色時間超過了穩(wěn)定時間，標(biāo)準(zhǔn)系列中高濃度溶液顏色減褪，致使曲線上端向下彎曲。




措施：控制好顯色劑的加入時間，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進(jìn)行，以使每支比色管的顯色時間相近。




5.干擾物質(zhì)的影響




標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制完畢了，該如何檢驗(yàn)？




標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)是實(shí)際操作中最大的難點(diǎn)，也是工作中誤區(qū)和爭議最多的話題了！




先來了解下最重要的三大檢驗(yàn)項目：




1.精密度檢驗(yàn)




標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度檢驗(yàn)：精密度檢驗(yàn)就是看試驗(yàn)點(diǎn)距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗(yàn)（擬合檢驗(yàn)），需用F檢驗(yàn)，P<0.05作為線性檢驗(yàn)合格的標(biāo)準(zhǔn)。




2.截距檢驗(yàn)




3.斜率檢驗(yàn)




標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距檢驗(yàn)和斜率檢驗(yàn)分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計學(xué)差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。




標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)應(yīng)該是線性檢驗(yàn)結(jié)合失擬檢驗(yàn)，以及殘差的正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)合才是統(tǒng)計學(xué)上比較完備的。




要想繪制出合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線、使用好標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)屬不易，所以必須將以上各個方面的條件都考慮進(jìn)去，即對標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制也實(shí)行質(zhì)量控制，只有這樣, 才能得出理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線。