干貨:細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)沉淀,什么原因?

    細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)中的重中之重，細(xì)胞沒有培養(yǎng)好實(shí)驗(yàn)記性不了，細(xì)胞培養(yǎng)好了，為后面的實(shí)驗(yàn)打下了雄厚的基礎(chǔ)！那細(xì)胞在培養(yǎng)中出現(xiàn)了沉淀，什么原因造成的呢？您知道嗎？好了，不賣關(guān)子了，恒遠(yuǎn)邀您一起來看看！

    細(xì)胞培養(yǎng)中的沉淀

    如果排除了污染，細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細(xì)胞健康，因?yàn)樗麄兺ㄟ^螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分，從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的，可能會(huì)干擾依賴成像的實(shí)驗(yàn)分析。

    產(chǎn)生沉淀的可能原因

    一、溫度變化

    在細(xì)胞培養(yǎng)中，溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的變化時(shí)，高分子量血漿蛋白會(huì)從溶液中析出；熱失活和凍融循環(huán)能促進(jìn)蛋白降解和沉淀；因?yàn)橐后w或重組成培養(yǎng)基在使用之間保持冷藏儲(chǔ)存，鹽可能沉淀，尤其是10x或其他濃縮的儲(chǔ)存液。

    二、失水誘導(dǎo)的濃度改變

    如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會(huì)增加，特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。

    三、鈣鹽

    制備無血清培養(yǎng)基時(shí)，組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會(huì)加劇這一問題。

    四、金屬補(bǔ)充物

    銅、鐵和鋅等金屬離子是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的，是無血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀，為細(xì)胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時(shí))，碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物；在氧化條件下，銅和鋅更易于沉淀。



    五、污染

    培養(yǎng)物渾濁可能是細(xì)菌或真菌污染造成的。

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