ELISA免疫測定,您真的掌握透徹了嗎?

    ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。ELISA免疫測定,您真的掌握透徹了嗎?不要著急，接著往下看！


ELISA免疫測定目的是？
1.測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等；
2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等；
3.測定抗生素和藥物；
4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；
5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等；


ELISA免疫測定原理：
①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；
②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶標 抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，zui后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。


ELISA免疫測定步驟：
1.包被；
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)；
3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；
5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml；
6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。


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